PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）幾乎是分子實(shí)驗(yàn)室里最常見的技術(shù)之一。但有時(shí)候，做著做著，條帶就是不上鏡：要么無條帶，要么全是拖尾，要么陰性對(duì)照還神奇地亮了……??

別急！今天我們就來盤點(diǎn) PCR失敗的5個(gè)常見原因，并提供實(shí)用的解決辦法，幫你少踩坑。

1???模板DNA質(zhì)量或濃度不合適

?? 表現(xiàn)：無條帶、條帶過弱或拖尾。

? ???

?? 原因：DNA降解、雜質(zhì)殘留，或者濃度過低/過高。

? 解決辦法：

• 保證DNA純度（A260/A280 = 1.8–2.0）；

• 稀釋過濃模板；

• 植物/土壤等樣本建議用高純度提取試劑盒。

2???引物設(shè)計(jì)或濃度有問題

???表現(xiàn)：非特異性條帶、引物二聚體。

???原因：引物設(shè)計(jì)不合理，濃度過高/過低。
??解決辦法：

• 長度18–25 bp，GC含量40–60%；

• 避免3’端互補(bǔ)；

• 終濃度一般0.1–0.5 μM，必要時(shí)做梯度PCR優(yōu)化。

3???PCR體系或酶活性問題

???表現(xiàn)：完全無擴(kuò)增或擴(kuò)增效率低。

???原因：Taq酶失活、Mg2?濃度不合適、dNTP降解。
??解決辦法：

• 分裝保存酶，避免反復(fù)凍融；

• 優(yōu)化Mg2?濃度（1.5–2.5 mM）；

• 用新鮮dNTP；

• 推薦選擇性能優(yōu)異的PCR預(yù)混液??? 預(yù)混液中已優(yōu)化了緩沖體系和酶活性，能顯著提升擴(kuò)增成功率，減少反復(fù)調(diào)試的時(shí)間，非常適合常規(guī)科研實(shí)驗(yàn)。

4???實(shí)驗(yàn)操作污染

???表現(xiàn)：陰性對(duì)照也出現(xiàn)條帶。

???原因：PCR產(chǎn)物殘留、移液槍污染、空氣中DNA污染。
??解決辦法：

• 嚴(yán)格分區(qū)操作（提取區(qū)/體系配置區(qū)/產(chǎn)物分析區(qū)分開）；

• 用帶濾芯的槍頭；

• 定期清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)，使用核酸去除劑。

5???循環(huán)條件設(shè)置不當(dāng)

???表現(xiàn)：條帶模糊、非特異性擴(kuò)增或無結(jié)果。

???原因：退火溫度過低/過高、延伸時(shí)間不足、循環(huán)數(shù)過多。
??解決辦法：

• 根據(jù)引物Tm值設(shè)置退火溫度；

• 延伸時(shí)間約 1 kb/min；

• 循環(huán)數(shù)控制在30–35次。

???總結(jié)

PCR失敗并不可怕，常見問題主要集中在?模板、引物、體系、操作和循環(huán)條件?這五個(gè)方面。逐一排查，總能找到原因。

而對(duì)于高校實(shí)驗(yàn)室或科研人員來說，選擇一款高性能PCR預(yù)混液，往往能讓PCR事半功倍，節(jié)省大量試錯(cuò)時(shí)間。

?? 科研路上，少一點(diǎn)彎路，多一點(diǎn)高效！

?東盛相關(guān)產(chǎn)品?

東盛生物PCR預(yù)混液、qPCR預(yù)混液、逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液、一步法RT-PCR/qPCR預(yù)混液等產(chǎn)品，性能優(yōu)越、性價(jià)比高，支持免費(fèi)試用和個(gè)性化定制。

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	適用場景
P2141	Super TaqMix	常規(guī)PCR擴(kuò)增
P2111	Super HIFI PCR Master Mix	長片段高保真擴(kuò)增
P2121	SYBR Green Blue qPCR Mix (Universal ROX+)	通用ROX染料法qPCR檢測
P2091	SYBR Green qPCR Mix	染料法高特異性基因定量分析
P2701	Multiplex Probe qPCR Mix Plus U	探針法多基因同時(shí)定量檢測
R1081	PowerScript RT SuperMix	全預(yù)混高效RNA逆轉(zhuǎn)錄
RP1001B	2X One Step RT-PCR Mix	快速逆轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增一體化
V5007	2X One Step Prime RT-qPCR Mix	快速靈敏的轉(zhuǎn)錄組基因定量檢測
P9013	dNTPs	PCR擴(kuò)增、cDNA合成
P9121	核酸去除劑	快速有效去除核酸污染
R1021	TRAzol	高效提取高質(zhì)量RNA

*僅列出最小規(guī)格的貨號(hào)，可點(diǎn)擊產(chǎn)品名稱在詳情頁查看全部貨號(hào)及規(guī)格

部分產(chǎn)品效果展示：

P2141：

?

GDSBIO?#P2141?Super TaqMix與知名品牌T同類產(chǎn)品的PCR產(chǎn)物對(duì)比

P2111:

GDSBIO #P2111?Super HIFI PCR Master Mix?與知名品牌T/A/B同類產(chǎn)品的PCR產(chǎn)物對(duì)比

P2121：

GDSBIO #P2121?SYBR? Green Blue qPCR Mix (Universal ROX+)?與知名品牌A/B/C/D/E同類產(chǎn)品的qPCR熔解曲線對(duì)比

?訂購咨詢?

廣州東盛生物科技有限公司
?? sales@gdsbio.com
?? 020-87791356
???www.1010zp.com